Centrifugación mediante un gradiente de densidades

Centrifugación mediante un gradiente de densidades

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¿Qué es la centrifugación mediante un gradiente de densidades?

La centrifugación mediante un gradiente de densidades es un sistema donde se separan las partículas en función de su densidad de flotación. Para ello, la muestra se mezcla en un medio con un gradiente de densidad más pronunciado o se pone por encima de éste;  siendo la base un perfil incremental  de sustancias como: sacarosa, cloruro de cesio, u otros. Al centrifugar, cada componente subcelular se desplaza en forma ascendente o descendente; hasta que alcance una ubicación dentro del tubo en la que su densidad sea igual a la de su entorno; esta ubicación se denomina situación de flotabilidad neutra. Luego de centrifugar se producen una serie de bandas homogéneas, comenzando desde el fondo  las partículas con mayor densidad de flotación.

Con mucha frecuencia, se utiliza la ultracentrífuga durante la realización de estos gradientes.

El método de gradiente de densidades implica la utilización de un soporte fluido cuya densidad aumenta comenzando desde la zona superior a la inferior; por ello, en la centrifugación mediante un gradiente de densidad, se puede utilizar uno, o una mezcla de varios líquidos; con el fin de obtener varias bandas, o fracciones de diferentes densidades.

El método es un poco más elaborado que la centrifugación diferencial, no obstante presenta ventajas que compensan el trabajo añadido. Esta técnica permite la separación de varios o todos los componentes de la muestra; y la realización de medidas analíticas.

Los gradientes basados por ejemplo en el cloruro de cesio se autogeneran; es decir, se forman en el propio proceso de centrifugación; o  también puede ser preformados, como por ejemplo en el caso de la sacarosa o del percol.

Solutos utilizados al realizar la centrifugación mediante un gradiente de densidades

Como solutos se utilizan la sacarosa, polisacáridos sintéticos, derivados yodados del ácido benzoico, percol, cloruro de cesio, el Ficoll,o  sales de metales alcalinos pesados como el rubidio o el cesio, entre otros. La muestra se deposita en la parte superior del gradiente como una fina banda, o en otros casos se mezcla; y tras centrifugar, la separación de los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas que pueden ser separadas (o fraccionadas).

Cuando elijas los solutos ten en cuenta que el material que utilices sea inerte o por lo menos; que no sea tóxico para el material biológico. Es por ello que las propiedades fisicoquímicas deben conocerse antes de decidir si se van a utilizar; y para para determinar la concentraciones adecuadas para el gradiente. Ten también presente que luego de la centrifugación, debe poder separar fácilmente la muestra del material, sin pérdida de la muestra o su actividad.

Hay dos variantes de este método: la centrifugación zonal y la centrifugación isopícnica. Si deseas profundizar en uno de ellos, has click en el enlace que hay bajo el siguiente título.

Otros tipos o métodos de centrifugación

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