Centrifugación diferencial o pelleting

Centrifugación diferencial o pelleting

Compartir usando:
  •  
  •  
  •  
  •  
  •  
  •  
  •  

¿Que es la centrifugación diferencial o pelleting?

La centrifugación diferencial, también llamada de frontera móvil; es el método más común utilizado hoy en día para fraccionar las células. Fraccionar las células es su separación en los diferentes organelos, para un análisis posterior de sus partes.

Alistamiento

  1. Se corta el tejido en presencia de un amortiguador isotónico helado. ¿Por qué?
    1. El frío  detiene las reacciones de la enzima.
    2. Debe ser isotónico para  evitar rompimientos bruscos en la célula por difusión osmótica.
    3. Un amortiguador para detener los cambios de PH.
  2. Se muele el tejido en una licuadora para romper las células abiertas.
  3. Se filtra para eliminar el tejido insoluble.

Centrifugado

En el proceso, una muestra de tejido se lisa primero para romper, de manera controlada, las membranas celulares y mezclar el contenido de la célula.

Lisis celular

La lisis celular es el proceso de ruptura de la membrana celular que produce la salida del material intracelular;  puede ser provocado ya sea  por enzimas o  por diferencias de conc entración  entre el exterior e interior a la membrana celular. Estas última puede causar ingresos bruscos del agua -difusión osmótica hypotónica- que produce hinchamiento de la célula hasta hacerlas explotar, lo cual puede compromer inclusive a los organelos.

En el caso del lisado controlado, lo que hacemos es someter las células a una secuencia de centrifugaciones; en cada una se incrementan secuencialmente las revoluciones, para conseguir mayores fuerzas de sedimentación; luego de cada operación se obtiene una separación en dos fases: la más pesada se va al fondo, y se denominada sedimento o Pellet; la más liviana, la cual queda en la parte superior del tubo, se denominada sobrenadante.

Pellet

Pellet es una palabra inglesa que también es  utilizada como verbo para indicar la acción de separar componentes  sedimentándolos.

Algunas veces el pellet es un solo elemento, pero en general es una mezcla de todos los componentes sedimentados. Ten en cuenta que el sedimento suele estar levemente contaminado con partículas sobrenadantes que pueden haber quedado atrapadas en el fondo del tubo. Una vez finalizada la centrifugación, el líquido sobrenadante se vierte con mucho cuidado en otro tubo; con lo cual se obtiene la separación entre el líquido y el sólido  pellet; esta operación, se llama decantación y es la más elemental de las técnicas de separación.

Según el caso, pueda que sea necesario repetir la centrifugación varias veces, cada vez a una mayor velocidad; a este proceso se le denomina recentrifugar. Según la necesidad del estudio, pueda que se requiera volver a centrifugar tanto  el sobrenadante como  el pellet, para obtener una mayor purificación.

¿Cómo se lisa la sangre?

En el caso de la sangre, se centrifuga el filtrado así:

Centrifugacion diferencial - sangre

Etapa 1: 1.000 x g durante 10 minutos. El sedimento obtenido es el núcleo, que es el orgánulo más denso.

Etapa 2: 10.000 x g durante 30 minutos. Sedimenta la mitocóndria que es el segundo orgánulo más denso.

Etapa 3: 100.000 x g durante 30 minutos. Sedimenta ER, el aparato de golgi y otros fragmentos de membrana.

Etapa 4: 300.000 x g durante 3 horas. Sedimenta ribosomas.

 

Finalmente, la purificación se puede realizar a través de la sedimentación de equilibrio, y la capa deseada se extrae para un análisis posterior.

Ventajas y desventajas de la centrifugación diferencial

La centrifugación diferencial se basa en una diferencia en la velocidad de sedimentación de las moléculas; es por ello que hay que tener en cuenta que la diferencia debe ser grande para poder ser observada al centrifugar, pues cuando hay partículas muy similares, tienden a sedimentar juntas. Este método es utilizado como centrifugación preparativa para separar partículas de otros componentes en la mezcla; no es útil para separar moléculas sobre todo entidades orgánicas que pueden poseer una densidad muy parecida.

Otros tipos o métodos de centrifugación

 

Deseo comprar una centrífuga o sus accesorios

 

Quiero aprender sobre equipos que centrifugan… quiero ir a

Quiero volver a la página de inicio, volver a

 

  •  
  •  
  •  
  •  
  •  
  •  
  •  

Deja un comentario